25日，國家美國食品藥品監督管理局醫療器械技術審評中心出具《2019新型冠狀病毒抗原/抗體檢測試劑注冊技術審評要點（試行）》。

指出本要點旨在指導注冊申請人準備和撰寫2019年新型冠狀病毒中抗原/抗體檢測試劑注冊申請材料，也為技術審評部門審查注冊申請材料提供參考。

也是對2019新型冠狀病毒抗原/抗體檢測試劑的一般要求。申請人應根據產品的具體特性確定內容是否適用。如果沒有，要闡述理由和相應的科學依據，并根據產品的具體特點，對注冊申請材料的內容進行充實和細化。

適用范圍

本綜述要點適用于2019新型冠狀病毒抗原/抗體檢測試劑，用于體外定性檢測血清、血漿、全血、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物中的2019新型冠狀病毒抗原/抗體。本審查要點適用于首次注冊的產品。

性能評估

企業應提交在符合質量管理體系的生產環境中生產的試劑盒進行性能評價和驗證的所有研究資料，包括具體的研究方法、實驗計劃、實驗數據、統計分析等詳細信息。建議重點關注以下分析性能。

1.樣本收集和處理

(1)樣本采集時間的選擇：是否受病程、臨床癥狀、用藥等因素影響。

(2)對于拭子樣本，研究采樣拭子和樣本保存液(采樣液)的要求：采樣拭子的材料要求(包括對拭子頭和拭子棒的要求)、保存容器、保存液(采樣液)的成分、濃度和用法等。)，等等。

(3)研究適用于血樣的抗凝劑。

2.最低檢測極限

(1)最低檢測限的確定

抗體檢測：建議選擇具有特定滴度的特定抗體陽性樣品進行梯度稀釋，以確定最低檢測限。每個梯度稀釋重復3-5次，每個稀釋重復不少于20次。陽性檢出率為90%-95%的抗體水平作為最低檢測限，抗體滴度應通過適當的方法確認。

抗原檢測：建議病毒梯度稀釋后研究確定最低檢測限。病毒稀釋的每個梯度應重復3 ~ 5次，每次稀釋應重復不少于20次。陽性檢出率為90% ~ 95%的病毒水平應作為最低檢測限，抗原濃度應采用適當的方法確認。

對于抗原、IgM抗體和IgG抗體，應選擇不同來源或培養后的病毒原液的三份有代表性的臨床樣本，確定最低檢測限。

(2)最低檢測限的驗證

在最低檢出限濃度水平下，至少選擇3個具有時間和地域特征的病毒株或臨床樣本(與最低檢出限確定的樣本不同的樣本)進行驗證，陽性檢出率應達到90% ~ 95%。

所用稀釋劑應與適用樣品類型的基質一致，陰性樣品可用于稀釋。抗原檢測試劑應提供詳細的病毒滴度測定方法，同時應詳細描述病毒樣本的確認方法和驗證結果。抗體檢測試劑應提供詳細的抗體類型和效價的確認方法和驗證結果。

3.驗證不同地區病毒樣本的包容性

提供具有時間和地域特征的不同來源患者的真實臨床樣本進行驗證。抗原、IgM抗體和IgG抗體檢測試劑分別用于研究10種不同的患者樣本。驗證內容應包括最低檢出限、重復性等。并提供樣品和濃度的確認方法和實驗數據。

4.分析特異性

(1)交叉反應驗證(抗原、IgM抗體和IgG抗體檢測試劑應分別驗證)

地方性人類冠狀病毒(HKU1、OC43、NL63和229 e)；

H1N1(新H1N1流感病毒(2009年)，季節性H1N1流感

提供用于交叉反應驗證的病原體和抗體的來源、陰陽、種/型、濃度/效價確認等所有檢測數據。抗原檢測試劑建議在病毒的醫學相關水平驗證交叉反應，如病毒濃度為105pfu/mL或更高。

驗證高濃度新型冠狀病毒特異性IgG抗體與特異性IgM抗體之間的交叉反應。

驗證正常樣品不少于20個。

(2)內源性/外源性物質的干擾

不同類型的樣品可能具有不同的潛在干擾物質，因此應根據具體的樣品類型選擇合適的干擾物質進行研究。建議申請人在潛在最大濃度(“最差條件”)下評估每種干擾物質，在病毒抗原和抗體的臨界陽性水平下進行干擾試驗驗證。

5.IgM抗體檢測試劑：對至少5份含有病原體特異性IgM抗體的樣本進行IgM破壞檢測。方法是用特定的化學品(如2-巰基乙醇或二硫蘇糖醇)處理樣品，然后重新測試。IgM檢測結果應為陰性。

6.精確

應對企業精度指標的評價標準做出合理要求，如標準差或變異系數等。模擬樣本不能反映臨床樣本所有可能的變異因素，因此精密度評價應同時包括多個臨床樣本。對此類產品的精度評估主要包括以下要求。

(1)驗證可能影響測試精度的主要變量，驗證測試時間、分析儀、操作員、位置、測試輪次等因素。

(2)設定合理的精度評估周期，例如，持續至少20天或5天的測試。具體方案請參考EP文件。從而綜合評價批內/批間、日內/日間以及不同操作者之間的精密度。

(3)用于精密度評價的臨床樣本應至少包含陰性樣本、臨界陽性樣本和(中等或強)陽性樣本三個水平，并根據產品特性設定適當的精密度要求。

陰性樣品：待測物質濃度低于最低檢測限或零濃度，陰性檢出率應為100%(n20)。

臨界陽性樣本：待測物質濃度略高于試劑盒最低檢測限，陽性檢出率應95%(n20)。

中/strong陽性樣品：待測物濃度為中到強陽性，陽性檢出率為100%，CV15%(n20)。

7.鉤子效應的研究。

8.提供企業標準物質的驗證數據：根據主要原料研究數據中企業標準物質的設置，用三批產品檢驗企業標準物質，提供詳細的實驗數據。

9.其他需要注意的問題

對于使用儀器進行結果解釋的產品，應提供產品說明書[適用型號]中列出的所有類型儀器的性能評價數據。

10.適用的樣本類型

如果產品適用于血清和血漿，可以用同源比較來驗證樣品的可比性。

如果產品適用于全血，可以用樣本類型進行全性能評價，或者至少最低檢測限，可以研究不同地區病毒樣本的包容性和精密度，也可以進行同源比較試驗。

注冊檢驗

應當提供由具有相應醫療器械檢驗資質和檢驗范圍的醫療器械檢驗機構進行的符合產品技術要求的產品檢驗報告，并提供連續三個生產批次樣品的檢驗合格報告。

這個項目沒有國家參照物，注冊檢驗要用企業參照物。如果發布了緊急情況下的國家參考，則應使用國家參考進行注冊和檢查。

陽性判斷值確定資料

提交由申報試劑的陰性/灰色區域/陽性結果的臨界值(CO)確定的研究資料，包括具體的實驗方案、人群和受試者樣本的選擇、評價標準、統計分析和研究數據等。用于建立陽性判斷值的樣本來源的選擇應考慮不同地理ar的影響

如適用，可采用受試者工作特征曲線(ROC)的分析方法選擇和確定合理的陽性判斷值；因此，如果存在一個模糊地帶，就應該明確建立該地帶的基礎。如果采用其他方法確認陽性判斷值，應說明該方法的合理性。

主要原材料研究資料

該產品的主要原料包括抗原、抗體、質控品和對照品。應提供主要原料的選擇和來源、制備工藝和質量標準等相關研究資料。如果主要原料是自制的，應提供詳細的制備過程；主要原材料來源于外購的，需提供的資料包括：選擇原材料的依據及對比篩選試驗數據、供應商提供的質量標準、出廠檢驗報告、原材料到貨后的質量檢驗數據。供應商應固定它們，不得隨意更改。申請人應詳細說明所有主要原材料的質量控制標準。

1.新型冠狀病毒特異性抗原和抗體

病原體特異性抗原和抗體是這類產品的關鍵原料。由于新型冠狀病毒不同地區、不同人群感染的毒株之間的差異尚不明確，在選擇抗原和抗體原料時，應注意抗原表位的選擇，避免毒株之間的差異造成假陰性，同時也要考慮抗原在其他冠狀病毒中的表達，避免交叉反應造成假陽性。這種考慮要在抗原和抗體原料的研究資料中詳細說明。

(1)新型冠狀病毒抗體檢測試劑中使用的特異性抗原

首先要詳細說明表位和選擇依據。另外，詳細的檢測數據如抗原來源、制備、篩選、純化、鑒定和質量標準(外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能試驗等。)應提交。

主要包括以下兩種情況：

企業自制抗原

如果是天然抗原，應詳細描述菌種選擇、培養、抗原提取、純化和鑒定的實驗過程。如果是重組抗原，應提交具體基因選擇、序列信息、克隆構建和轉化、抗原表達、純化和鑒定等詳細信息。

企業購買的抗原

應詳細說明抗原名稱、抗原的生物來源、供應商名稱、供應商選擇的研究數據以及供應商出具的抗原性能指標和檢驗報告。

(2)用于新型冠狀病毒抗原檢測試劑的特異性抗體

首先要詳細說明抗體所針對的表位、制備抗體所使用的免疫原以及確定抗體為主要原料的依據。另外，詳細的檢測數據如抗體來源、制備、篩選、鑒定和質量標準(外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價、功能試驗等。)應提交。

主要包括以下兩種情況：

企業自制抗體

如果使用天然抗原作為免疫原，應提供天然抗原的來源；如果使用重組抗原或其他合成抗原作為免疫原，應提供相應的核酸或蛋白質序列信息。對于抗體的制備和鑒定，應提交詳細的研究資料和工藝穩定性驗證資料。

企業購買的抗體。

應詳細說明抗體的名稱、生物來源和供應商名稱；提交供應商選定的研究數據和供應商出具的抗體性能指標和檢驗報告。

2.其他主要原輔材料

除上述主要原料外，產品中包含的其他主要原料，如鼠抗人IgM/IgG單克隆抗體、酶標抗體、膠體金、硝酸纖維素膜、微孔板、樣品稀釋液等。應選擇并核實，并提交相關資料。定義主要原材料的供應商和質量控制標準。如果免疫層析產品適用于全血，應介紹血細胞去除方法，并驗證去除效果。

3.試劑盒質量控制/質量控制線

應為產品設置合理的質控品/質控線。質量控制至少應包含陰性和陽性水平。抗原陽性質控品可以是滅活的病毒株或臨床陽性樣本，也可以是假病毒。抗體試劑陽性質控品可選用臨床陽性樣本，陰性質控品可選用臨床陰性樣本或陰性基質。提交相關原材料的來源、選擇、性能確認等相關研究資料，明確供應商和質量控制標準。企業應對質控品的檢測結果(如A值)做出明確的范圍要求(檢測有效性的判定)。

4.企業參考產品

申報產品有相應國家標準物質的，企業標準物質應參照國家標準物質的項目設置，不得低于國家標準物質的要求。如果沒有國家參照產品，申請人應根據產品性能驗證的實際情況設定企業參照產品。

應提交企業對照品的原料來源、選擇、制備、陰陽性、濃度/效價的確認方法或試劑等相關驗證材料。企業參考的基質應與待測樣品相同。新型冠狀病毒抗體/抗原檢測試劑企業參照品的建立建議如下：

(1)陽性對照品

對照品應涵蓋不同來源和特征的新型冠狀病毒感染樣本，至少可選擇5份確認為陽性的臨床樣本，并可設定不同的效價水平。

(2)陰性對照品

陰性對照品應考慮檢測特異性的評價，應包括正常臨床樣本、含類風濕因子等干擾因子的樣本以及其他病原體特異性抗體和抗原陽性樣本。建議包括冠狀病毒(HKU1、OC43、NL63、229E)、SARS冠狀病毒(可不包括抗體檢測)、MERS冠狀病毒(可不包括抗體檢測)、流感病毒、腸道病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒。

(3)檢測限對照品

可以設置一系列臨床陽性樣本的稀釋樣本，其中應包括檢測限水平。

(4)重復性對照品

建議包含高濃度和低濃度的臨床樣本，其中一個樣本應接近最低檢測限。

主要生產工藝及反應體系的研究資料

1.產品基本反應原理介紹。

2.對主要生產工藝的介紹，可以用流程圖的形式表示，并簡要說明主要生產工藝的確定依據。

3.涂層/標記工藝研究中，申請人應考慮諸如涂層/標記液體積、濃度、時間、條件等指標的影響。對產品性能的影響，并通過實驗確定上述指標的最佳組合。

4.介紹顯色體系、酶作用的底物和最佳條件的研究。

5.反應條件的確定：申請人應考慮反應時間、判讀時間、反應溫度、洗滌液體積和洗滌次數(如涉及)對產品性能的影響，通過實驗確定上述條件的最佳組合。

6.反應體系中加樣方式和加樣量的確定：通過實驗確定最佳的加樣方式和加樣量。如果樣品需要稀釋或用其他必要的方法處理后才能用于最終檢測，申請人還應研究樣品稀釋劑及其用量和其他必要的處理方法。對于IgM抗體檢測試劑，如果采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對結果的影響，合理設置與IgG去除相關的樣品處理步驟，減少特異性IgG引起的假陰性和假陽性。

穩定性研究資料

穩定性研究資料主要涉及兩部分：申報試劑的穩定性和適用樣品的穩定性。

1.申報試劑的穩定性主要包括實時穩定性(有效期)、開瓶(開啟)穩定性、高溫加速破壞穩定性、運輸穩定性等研究。申請人可根據實際需要選擇合理的穩定性研究方案。穩定性研究數據應包括de

申請人應合理驗證樣品的穩定性，主要驗證冷藏和冷凍兩種條件下的有效期。在合理的溫度范圍內，可以每隔一定時間對儲存的樣品進行驗證，從而確認不同類型樣品的穩定性。如果保存溶液(取樣溶液等。)需要在樣品采集后添加，應同時研究處理后樣品的穩定性。

此外，如果使用加熱樣品(如熱滅活)進行檢測，對于加熱前后的病原體特異性IgM抗體陽性樣品，應驗證加熱因素的干擾。方法是在臨界值附近，對至少5個弱陽性加熱和未加熱樣品進行比較檢測，比較檢測結果的差異。

臨床證據

新型冠狀病毒抗原/抗體檢測試劑的臨床試驗應按要求在三個以上臨床試驗機構(包括各級疾病預防控制中心)進行，用于檢測的體外診斷試劑應與可獲得的臨床參考標準進行比較，以確認產品的臨床性能。如果臨床試驗機構條件允許，建議幾家廠商的試劑盒在同一臨床試驗機構聯合驗證。

1.臨床參考標準的確定

已進入應急審批的新型冠狀病毒抗原/抗體檢測試劑，一般有望用于新型冠狀病毒感染肺炎的輔助診斷。在臨床試驗中，應選擇新型冠狀病毒感染肺炎的診斷標準和疾病進程的判斷結果作為對比研究的對比方法。國家衛健委發布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案》等文件明確了新型冠狀病毒肺炎的診斷標準。同時建議參考診斷中使用的核酸檢測結果，以全面評價抗原抗體檢測試劑的臨床性能。

2.參加臨床試驗的人

臨床試驗的入選人群應為該產品的預期適用人群，該產品的適用人群為新型冠狀病毒肺炎疑似病例。關于“疑似病例”的定義，請參考當前有效的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案》。

臨床試驗的入選人群應能代表該產品適用的所有類型人群，包括新型冠狀病毒感染肺炎的確診病例(包括部分恢復期病例)和排除病例等。

其中，確診病例應包括不同疾病進程的患者(如發病早期、中期、治療晚期/恢復期等。).

此外，還應包括在不同時間從一些感染新型冠狀病毒的肺炎患者中收集的連續樣本，包括從陰性到陽性的每個階段的新型冠狀病毒核酸和抗原/抗體的樣本。

3.臨床試驗樣本的類型

適用于新型冠狀病毒抗體檢測試劑的樣本類型一般包括血清、血漿和全血，適用于新型冠狀病毒抗原檢測試劑的樣本類型一般包括呼吸道樣本如咽拭子。建議按照《新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術指南》收集試劑盒樣品。

對于不同的樣本類型，如果臨床前研究確認檢測性能無差異(如血清和血漿樣本)，可進行統計匯總或在臨床試驗中對比同源樣本；在其他情況下，建議對不同樣本類型分別進行統計分析，并分別滿足病例數的要求。比如匯總統計要有充分的依據。

4.臨床試驗的樣本量

目前研發的新型冠狀病毒抗原/抗體檢測試劑一般都是定性檢測產品。在臨床試驗中，建議根據預設的臨床敏感性、臨床特異性等臨床評價指標及相關統計參數，采用合理的統計模型估計最小樣本量。其中，臨床評價指標應根據產品的前期研究確定。比如，臨床敏感度預計為85%，按照抽樣準確度公式估算，確診病例應不少于200例；預期特異性可達95%。根據該類檢測試劑的臨床特異性要求，特異性目標值設定為90%。根據目標值m的公式

5.臨床試驗結果的統計分析

此類產品臨床試驗的目的是驗證申報產品與臨床參考標準之間的一致性。統計分析一般以22表格的形式匯總結果，然后計算臨床敏感性、臨床特異性和可信區間。

對于診斷/排除新型冠狀病毒感染結論的病例，應按照上述方法，以臨床診斷標準為對照，評價實驗所用體外診斷試劑的臨床敏感性和特異性。同時對不同疾病階段的患者進行分層分析。臨床性能綜合評價指標和各亞組評價指標應滿足該類檢測試劑的臨床要求。

根據不同時間采集的新型冠狀病毒感染肺炎患者的連續樣本，同時比較核酸檢測結果，評價新型冠狀病毒感染體外診斷試劑的檢測能力和窗口期。

為評價IgG和IgM聯合檢測的臨床意義，除對IgG和IgM的檢測結果進行統計分析外，還應進行兩項指標綜合評價的統計分析。

臨床試驗中所有不一致的結果都要結合患者的流行病學背景、臨床癥狀、疾病轉歸等信息進行充分分析。

6.臨床證據的形式要求

申請人應按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》、《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》等法律法規的要求，提交各機構的倫理審查意見、臨床試驗方案和臨床試驗報告、臨床試驗總結報告。

臨床試驗數據摘要作為臨床試驗報告的附件提交。數據表應包括編號、年齡、性別、樣本類型、采集時間、臨床診斷背景信息、本產品的檢測結果和新型冠狀病毒感染的診斷或排除結果等。同時，請注明用于疾病診斷的核酸檢測結果(包括核酸檢測試劑名稱)。臨床數據集中的每個病例號都應該是可追溯的。鑒于抗原和抗體的產生與病原體感染的病程密切相關，建議在臨床背景資料中詳細說明患者的發病時間、癥狀變化和疾病轉歸(具體要求見附表)。

原標題：2019-NCOV檢測試劑注冊技術評審要點在此！